Какие другие анализы крови на туберкулез применяются вместо Манту

Новый коронавирус SARS-CoV-2, вызвавший пандемию несколько месяцев назад, пока недостаточно изучен. Ученые только постигают, чем лучше лечить COVID-19, какие осложнения он может вызвать, к каким отдаленным последствиям для здоровья привести. Однако диагностирование патологии вопросов практически не вызывает. Метод ПЦР, так называемый золотой стандарт в выявлении инфекций, оказался эффективен и в отношении этого возбудителя.

Что такое ПЦР?

Для обнаружения микобактерий туберкулеза в организме уже более ста лет успешно применяется проба Манту. Хорошо себя зарекомендовали и другие методы: бактериологический посев в искусственной среде, микроскопия мазка, ИФА. Однако большое количество осложнений и ложноположительных результатов, а также длительность некоторых способов потребовало внедрения новых технологий в методику диагностики. Огромным прорывом в области микробиологии стало появление анализа ПЦР на туберкулез. Вот уже несколько десятилетий он показывает свою эффективность и широко применяется для дифференциальной диагностики различных форм туберкулеза.

ПЦР анализ на туберкулез или полимеразная цепная реакция – это метод обнаружения ДНК бактерий или их фрагментов, в основе которого лежит увеличение молекул нуклеиновой кислоты под действием фермента ДНК-полимеразы. Для положительного результата достаточно всего одной молекулы болезнетворной ДНК, поэтому этот метод считается высокочувствительным. Диагностика ПРЦ при туберкулезе более эффективна, чем посев микобактерий в искусственной среде, так как в отличие от культурального метода позволяет различить дикие и вакцинные штаммы, привитые БЦЖ. Это позволяет избежать ложноположитеьного результата и сделать диагноз более точным.

Дополнительные сведения

Для того чтобы всемирный день борьбы с туберкулезом оказался менее востребованным днем, следует учитывать дополнительные характеристики при диагностике по отношению к микобактериям. Одной из целей ПЦР является исключение формирования осложнений и возможность исключения воспаления.

В связи с этим следует уделять внимание пункции, как методике удаления излишнего соотношения мокроты. Способ может применяться не во всех ситуациях, однако многими пульмонологами он воспринимается не только как диагностическое мероприятие, но и как терапевтическое. Поэтому перед ее применением следует проконсультироваться со специалистом и делать это на каждом этапе развития заболевания.

Учитывая преимущества и недостатки ПЦР, можно утверждать, что для наиболее точной постановки диагноза правильно будет использовать дополнительные методики. Это позволит с максимальной точностью установить степень поражения организма и вероятность развития осложнений. Именно при таком подходе к диагностике можно говорить об эффективном лечении заболевания.

Особенности теста ПЦР на новый коронавирус

Вирус SARS-CoV-2, как все респираторные агенты, проникает внутрь через слизистые оболочки носа, глаз или рта. В клетках он закрепляется, цепляясь специфическими шипами к рецепторам на их мембранах. Наиболее уязвимы для поражения ткани системы дыхания, мочевыделения, пищеварения, ЦНС, сердца. Их поверхность содержит рецепторы АПФ2 и ACE2, к которым тропны белки коронавируса.

В первые дни после заражения SARS-CoV-2 активно размножается в эпителии носоглотки. Инфекция содержится в отделяемом слизистом секрете и слюне. Носители, не подозревая об этом, распространяют ее при чихании, кашле, глубоком дыхании. Даже не имея симптомов такие люди опасны для окружающих. Выраженный COVID в большинстве случаев не отличается от обычных ОРВИ, специфических проявлений у него нет. Определить, заражен ли человек новым патогеном, способна только ПЦР.

В крови и лимфе коронавирусы не циркулируют. Пробы на анализ берут со слизистых оболочек носоглотки. Опыт медиков показал, что у людей с бессимптомным и манифестным течением болезни точностью исследования — около 80%, довольно велика вероятность ложноотрицательных результатов. На эпителии возбудитель долго не задерживается, подвергаясь иммунным атакам. По этой причине рационально повторять обследование несколько раз. А при длительном невыявлении вируса у людей с подозрением на COVID следует сдавать кровь на антитела к инфекции методом ИФА.

Стадии заболевания

Специалисты выделяют 3 стадии развития болезни. На каждом последующем этапе туберкулез выявляется легче, а здоровье пациента ухудшается:

  1. Первая стадия – первичное инфицирование: воспалительный процесс развивается в месте локализации инфекции, не распространяясь на другие органы. Бактерии достигают лимфоузлов. Происходит формирование первичного комплекса. Часто пациенты не испытывают серьезного дискомфорта. Специфические симптомы отсутствуют. Возможно раннее выявление туберкулеза.
  2. Вторая стадия – скрытая инфекция: при ослабленном иммунитете количество микобактерий увеличивается. Они распространяются с помощью кровотока по организму, провоцируя возникновение воспалений. Рекомендуется использовать эффективный метод выявления туберкулеза (рентген).
  3. Третья стадия – рецидивирующий туберкулез взрослого типа: происходит поражение зараженных органов (чаще микобактерии локализуются в легких). В легких образуются полости, которые со временем прорывают бронхи. Болезнь переходит в открытую форму. Пациент оказывается заразным.
Читайте также:  Как проявляется туберкулез легких у детей?

Ранее выявление туберкулеза позволяет остановить воспалительный процесс до наступления критической стадии.

Выделяют несколько видов туберкулеза (зависят от нанесенного организму ущерба):

  • фиброзно-кавернозный;
  • милиарный;
  • ПЦР мочи;
  • казеозная пневмония;
  • очаговый;
  • диссеминированный;
  • инфильтративный;
  • кавернозный;
  • цирротический;
  • туберкулема.

Диагностика туберкулеза легких у взрослых проводится после осмотра пациента. Специалист обязан задать пациенту следующие вопросы:

  1. Был ли пациент ранее болен туберкулезом?
  2. Контактирует ли он с больными туберкулезом?
  3. Есть ли больные этим заболеванием среди родственников, ближайшего окружения?
  4. Повышена ли чувствительность на туберкулин и состоит ли пациент на учете в диспансере?
  5. Контактирует ли пациент с заключенными или сам был в местах лишения свободы?
  6. Когда в последний раз делал флюорографию?
  7. В каких условиях проживает больной (пациент без определенного места жительства, мигрант, проживает в неблагоприятных условиях)?

Затем проводится лабораторная диагностика туберкулеза.

Проведение ПЦР

Особо важен тот факт, что эта методика способна выявить возбудителя не только туберкулеза, но и огромное количество других и даже ВИЧ.

Причем сам анализ на туберкулез может проводиться с любым материалом, например:

  • кал;
  • кровь;
  • выделения из половых органов;
  • моча;
  • спинномозговая жидкость;
  • мокрота;
  • соскоб.

Для проведения ПЦР необходимо направление от врача, который выписывает его в следующих случаях:

  1. Когда человек на протяжении достаточно долгого времени болеет каким-либо заболеванием дыхательных путей в острой форме.
  2. Когда имеются симптомы наличия в организме болезни.
  3. Если человек имел контакт с больным туберкулезом.
  4. В случае спорной ситуации, при получении рентгеновских снимков.

Перед тем как отправиться на сдачу анализов, пациент должен обязательно ознакомиться с подготовкой, а именно:

  • не есть минимум за четыре часа;
  • за сутки ограничить употребление жирной и аллергенной пищи;
  • не принимать лекарственные средства за сутки до сдачи анализов.

После того, как анализы были взяты, специалист приступает к работе:

  1. Проводится денатурация ДНК путем разъединения цепочек с применением высоких температур.
  2. Следующий этап носит название отжиг и представляет собой понижение температуры с целью связи праймера с нитью ДНК.
  3. Заключительный этап носит название – элонгация, при которой и происходит синтезирование необходимых молекул.

Но данный метод выявления инфекции далеко не везде применяется, связано это прежде всего с дорогим оборудованием, которое не может позволить себе приобрести государственная поликлиника.

Именно по этой причине ПЦР назначается только в особых случаях, когда диагноз под вопросом или же когда невозможно произвести другие методы исследования.

Можно ли применять ПЦР на туберкулез вместо Манту? — Первый по туберкулезу

Оглавление: [скрыть]

  • Полимеразная цепная реакция: особенности метода
  • Возможна ли взаимозаменяемость диагностических методов?

Актуальной для родителей проблемой является правомерность и эффективность использования метода ПЦР на туберкулез вместо Манту.

Каждый год туберкулез поражает все большее количество населения, и дети в этом списке не являются исключением.

Эффективность лечения напрямую зависит от быстрой и достоверной диагностики, позволяющей определить микобактерии заболевания.

Не менее важным является определение наличия латентного (не проявляющегося внешне) туберкулеза, что позволяет вовремя начать профилактическое лечение и предотвратить таким образом активный этап в его течении.

Полимеразная цепная реакция: особенности метода

Традиционно в профилактических целях используется вакцина БЦЖ, а в диагностических — проба Манту. Однако в последнее время в связи с возникающими после процедур осложнениями и неточностью диагностических результатов ставится вопрос о современной, более точной и эффективной альтернативе популярным ранее методам.

Один из прогрессивных методов диагностики туберкулеза — ПЦР. Возникает вопрос, является ли его применение вместо Манту оправданным и правомерным.

Полимеразная цепная реакция (понятие «цепной» реакции в данном контексте употребляется для обозначения серии процессов, связанных продуктом или энергией, которые одновременно являются участниками предыдущего и последующего этапа и приводят к ускорению или поддержанию реакций), открытие которой считается одним из наиболее значимых событий микробиологической науки последнего времени, позволяет ученым имитировать естественное самовоспроизведение ДНК с целью выявления специфических болезнетворных молекул.

Результаты этого доказательного и высокочувствительного метода можно получить уже через 1-2 дня. Для сравнения, результаты распространенного культурального метода с применением тестов готовы минимум через 6 недель, а в среднем процедура длится до 15 недель.

БЦЖ не позволяет определить, в каких случаях речь идет о поствакцинальной аллергии, а в каких — о сенсибилизации организма болезнетворными микобактериями туберкулеза. Культуральный метод не дает возможности отличить дикие штаммы и вакционные (M. bovis и M. bovis BCG соответственно).

  • Со всеми этими задачами прекрасно справляется ПЦР, однако этот факт не является свидетельством того, что она может быть использована вместо Манту.

Как это все происходит в лаборатории

Выделение ДНК

Сначала пробу биологического материала подготавливают: центрифугируют, осаждают и т.д. Затем лаборантам необходимо выделить ДНК из полученного биологического концентрата. Амплификация (увеличение числа копий ДНК) Важнейший этап исследования. Проводится в термоциклере и именно здесь проходят все процессы, подпадающие под определение полимеразно-цепная реакция: денатурация, отжиг, элонгация. Денатурация Самый первый этап – развернуть (денатурировать) нуклеиновые кислоты, чтоб сделать их доступными для дальнейшей работы. Осуществляется путем нагрева реакционной смеси до 80-90 °C. Отжиг Денатурированные (распущенные) ДНК/РНК обрабатывают праймерами — изготовленными в лабораторных условиях коротенькими цепочками нуклеиновых кислот. Благодаря запрограммированному участку, праймеры прикрепляются только к тем нуклеиновым кислотам, для которых были созданы. Например, праймер для вируса простого герпеса 1 типа, никогда не свяжется с ДНК другого вируса, микроорганизма или клетки. Именно праймеры обусловливают крайне высокую специфичность ПЦР – способность реагировать только на нуклеиновые молекулы конкретных типов, видов классов и даже штаммов микроорганизмов. Или отдельные виды клеток живых организмов.

Читайте также:  Коронавирус и туберкулёз: в чём общее и что опаснее

Элонгация

Или синтез. После завершения процесса отжига, в реакционной смеси создают условия для активности полимеразы. Фермент, ориентируясь на молекулы праймеров (а не исходных нуклеиновых кислот), начинает синтез новых ниток ДНК/РНК. Которые становятся копиями исходных, искомых молекул нуклеиновых кислот. Такой температурный цикл проводится 30 и более раз. В результате, даже при изначально небольшом количестве искомого генетического материала, в реакционной смеси накапливается значительное число «помеченных» праймерами нуклеиновых кислот (растет экспоненциально, с удвоением при каждом цикле).Обнаружить большие количества ДНК/РНК намного проще, за счет чего реализуется еще одно преимущество ПЦР – высочайшая чувствительность.

Детекция

Оценка результатов ПЦР проводится несколькими путями:

  1. Электрофорез в вязкой среде. Суть в том, что ДНК/РНК заряжены электрически и движутся к одному из электродов. В среду (агар или полиакридный гель) добавляют краситель ДНК (например – бромистый этидий). В процессе сеанса электрофореза, молекулы нуклеиновых кислот движутся и формируют скопления, подкрашенные этидием. Под ультрафиолетом, это выглядит в виде полосок разной толщины и яркости.
  2. Метод гибридизации. Используются праймеры, заранее помеченные люминофором (флуорофором). После нужного числа температурных циклов, применяют специальный прибор – детектор флюоресценции. За счет того, что в образец можно добавлять флуорофоры для разных мишеней (они будут и светиться под ультрафиолетом разным цветом), метод гибридизации подходит для диагностики сразу нескольких мишеней в одном образце.
  3. ПЦР диагностика в реальном времени (real-time PCR). Отличается тем, что детекция проводится прямо в процессе амплификации. Для этого нужны зонды-люминофоры (из предыдущего пункта) и специальные приборы ДНК-амплификаторы. Эти устройства оценивают нарастание яркости люминофора после каждого температурного цикла и впоследствии, вычисляют исходное число искомых нуклеиновых кислот в образце.

Описание болезни

В ХIХ веке туберкулез называли чахоткой. Болезнь представляет собой инфекционное поражение внутренних органов, преимущественно легких. Туберкулез передается воздушно-капельным путем при чихании и кашле. Объектом заражения может быть как человек, так и животное.

В зависимости от степени воздействия заболевшего человека на окружающих различают 2 формы заболевания:

  1. Закрытая форма туберкулеза. Она не является опасной, т.к. человек не может заразить окружающих. Даже в анализах, в т.ч. и ПЦР, микобактерии заболевания не выявляются. Но все же опасность при данной форме присутствует, т.к. в любой момент закрытая форма может перейти в открытую. Такая активная форма туберкулеза может быть опасна не только для самого больного, но и для окружающих.
  2. Открытая форма инфекции. При ней в биологических жидкостях человека выявляется палочка Коха. Больной туберкулезом на этой стадии несет особую угрозу для окружающих. Заразиться можно даже в том случае, если носитель тщательно следит за собой в плане гигиены.

К наиболее распространенным методам исследований, проводимых для выявления болезни, относятся:

  1. Флюорография.
  2. Томография грудной клетки или других пораженных мест.
  3. Рентгенографическое исследование.
  4. Исследование биологических материалов больного.
  5. Туберкулиновая проба (Манту).

К наиболее эффективным способам выявить палочку Коха относится молекулярно-генетический анализ полимеразной цепной реакции — ПЦР диагностика туберкулеза.

  • Флюорография — способ диагностирования заболевания, знакомый каждому жителю СНГ. При помощи рентгеновых лучей исследуются легкие и внутригрудные лимфатические узлы.
  • Рентгенография грудной клетки – похожий на флюорографию, но более качественный метод обнаружения инфекции. Снимок получается в двух проекциях, но эта процедура примерно в шесть раз дороже. Обычно ей пользуются после того, как возникли серьезные подозрения на заболевание.
  • Компьютерная томография осуществляется как дополнительная диагностика, применяемая также после серьезных оснований на наличие инфекции.

К хирургическим способам диагностирования относят эндоскопию бронхов, а также медиастиноскопию и торакокоскопию.

Первый метод заключается в исследовании бронхиального дерева легких при помощи «зонда» в этот орган. Остальные два способа дают возможность изучить плевральную часть легкого при помощи прокола грудной клетки.

К лабораторным исследованиям относят:

  • Анализ мокроты на туберкулезную палочку.
  • Микроскопические исследования.
  • ПЦР диагностика туберкулеза

Пцр диагностика туберкулеза – суть метода, плюсы и минусы

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

Читайте также:  5 препаратов витаминов В группы в уколах

Плюсы ПЦР-диагностики

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

  • Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
  • Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
  • ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
  • С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
  • Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
  • Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
  • Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
  • ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
  • Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы ПЦР-диагностики

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

  • Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
  • Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
  • При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
  • Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
  • Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

Где пройти ПЦР-исследование на туберкулез

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

Процесс сбора анализов

Но не только больной обязан соблюдать необходимые условия. То же относится и к врачам. Чтобы забор анализов на туберкулез был проведен правильно, нужно делать это только в стерильных условиях, иначе в жидкую среду могут попасть другие микроорганизмы, следовательно, интерпретация будет неверной. Все инструменты, приборы и контейнеры тоже должны быть в стерильном виде.

Итак, материал собирается в специальные контейнеры, которые при необходимости специалист дает пациенту. Например, моча собирается только первая после пробуждения человека утром. Но при этом необходимо провести утренние водные процедуры в соответствующих местах. Мочи для сбора достаточно от 20 до 30 мл. А вот синовиальную жидкость из спинного мозга и прочие сложные анализы берет только высококвалифицированный специалист, находящийся в стационарных условиях.

У женской половины человечества мазок берет только гинеколог на специализированном кресле, а у мужчин соскоб или мазок забирается из мочеиспускательного канала (из наружной части). Из зева мазок берет врач специальной лопаткой или другими инструментами. Кровь берется непосредственно из вены стерильными шприцами.

На последнем этапе сбора доктор с учетом всех требований транспортировки и хранения направляет образец в специальную лабораторию для дальнейшего исследования. Для этого персонал лаборатории помещает кровь или прочие мазки в пробирку, в которую заблаговременно добавлено вещество, препятствующее преждевременному старению образца.

В случае с кровью, что особенно важно, данное вещество не позволяет ей свернуться, следовательно, наличие сгустков исключено. Пробирки при этом не встряхиваются, так как можно повредить состояние эритроцитов. Это все нужно для того, чтобы легче и быстрее было определить все компоненты крови.

Потом кровь на туберкулез центрифугируют, чем отделяют от плазмы клеточный осадок, который и изучается под микроскопом. Изучив первоначальные данные, добавляют фермент (транскриптазу) и при определенном температурном режиме проводят следующую цепную реакцию. Благодаря этому образуются фрагменты генетического материала, которые и подвергаются расшифровке.